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dmem培养液的配制(dmem培养液怎么配)

dmem培养液的配制原理?

配制DMEM培养基正常血清没有过滤,双抗体不需要过滤,可添加在前面(如果需要的话,除非双反)培养基的罕见的内容,否则就不需要在零下20摄氏度保存,培养两周跑出去不在4存储任何问题。另外,我不同意与冷冻细胞明显高于血清,没有根据。在ATCC细胞冻存的描述看,我很少使用血清,一般10%二甲基亚砜+90%和冷冻液配方血清中是常用的。冻存存活率极高的细胞。(当然,冷冻也是非常重要的存储过程)

  

  配制DMEM培养基时血清不必要过滤,但我认为双反应进行过滤,毕竟,是不是很麻烦。同时对细胞冷冻血清添加量存在着一定的问题,重要的是冷冻程序,如离心速度不太大,有二甲基亚砜的量不能超过10%,这是非常重要的。

  

  配制DMEM培养基除了DMEM粉末直接加入,也应按照说明书添加碳酸氢钠适量,它是关于2G,pH值可能远大于你所需要的pH值,再加入适量HEPES,约2.38g,pH满意度,根据需要添加双抗,过滤,分装。如果数量不多,储存超过20度,必要时添加血清,血清是不需要消毒,因为合格血清已达到无菌的条件下,摇它

体细胞培养用什么培养基?

1、RPMI-1640 Medium

RPMI-1640广泛应用于哺乳动物 、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。

2、Minimum Essential Medium(MEM)

也称最低必需培养基,它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单,可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型,而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。

3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

5、DMEM/F12

DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂,含有多种微量元素,和DMEM以1:1结合,称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium),作为开发无血清配方的基础,以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在DMEM/F12(1:1)中加入15mMHEPES缓冲液。

6、McCoy’s 5A

McCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。

7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)

Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为 Iscove’s Medium,用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞,LPS刺激的B细胞,骨髓造血细胞,T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液,因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。

8、M-199 Medium

1950年,Morgan成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液,即M-199,主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞。

9、Leibovitz Medium (L-15)

L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。

10、Ham’s F-10培养基:适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。

11、Ham’s F-12培养基:可以在加入很少血清的情况下应用,特别适合单细胞培养和克隆化培养,是无血清培养中常用的基础培养液。

12、William’s Medium E:用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。

13、MCDB 131 培养液:用于培养内皮细胞。

14、Opti-MEM I Reduced Serum Media:用于培养造血细胞。

15、植物血凝素(PHA):增加细胞转化和DNA合成。

dmem完全培养基怎么配制?

1.提前一天将分装好的FBS从—20℃冰箱取出,放于4℃冰箱化冻;

2.在细胞间中将FBS以及其它需要添加的成分(如,丙酮酸钠、抗生素等),按照比例加入DMEM培养基中,作好标签;放入4℃冰箱保存。

配制比例如下:

DMEM(High glucose)/ DMEM培养基(高糖)

谷氨酰胺

50ul

非必需氨基酸

500ul

丙酮酸钠

500ul

B-巯基乙醇

双抗

50ul

血清

7.5ml

LIF

5ul

二、ES细胞培养基

DMEM+15%FBS

2-巯基乙醇

5.5uM

1000X

L-谷氨酰胺

2mM

100X

LIF

1000U/mL

10000X

非必需氨基酸

100uM

100X

双抗

100X

DMEM细胞培养基的成分是什么?

DMEM培养基成份:精氨酸,84.00 mg/L;胱氨酸,62.60 mg/L;甘氨酸,30.00 mg/L;组氨酸,42.00 mg/L; 异亮氨酸,105.00 mg/L;亮氨酸,105.00 mg/L;赖氨酸,146.00 mg/L;蛋氨酸,30.00 mg/L;苯丙氨酸,65.00 mg/L;丝氨酸,42.00 mg/L;苏氨酸,95.00 mg/L;色氨酸,16.00 mg/L;缬氨酸,91.00 mg/L;氯化钙,265.00 mg/L;硫酸镁,97.67 mg/L;氯化钾,400.00 mg/L;磷酸二氢钠,109.00 mg/L;氯化纳,4400 mg/L;肌醇,7.20 mg/L;尼克酰胺,4.00 mg/L;D-泛酸(半钙),4.00 mg/L;吡哆醛,4.00 mg/L;硫胺素,4.00 mg/L;核黄素,0.40 mg/L;叶酸,4.00 mg/L;D-葡萄糖,1000 mg/L;酚红,9.30 mg/L;丙酮酸钠,110.00 mg/L;碳酸氢钠,3700 mg/L;谷氨酰胺,72.00 mg/L。[摘自司徒镇强版《细胞培养]

从成份列表中可以看出,每升DMEM培养基中含有265.00 mg的氯化钙,是有钙离子成分的。但如果买商品化的液体培养基或粉末的话,要具体参考各公司产品目录的详细信息。

dmem是什么培养基?

DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长,适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

正文

DMEM是 dulbecco’s modified eagle medium的缩写,所以其特点主要包括以下:(1)氨基酸含量为依格尔培养基的2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等;(2)维生素含量为依格尔培养基的4倍;3)含有糖酵解途径中的重要物质–丙酮酸;(4)含有微量的铁离子。

dmem完全培养基是什么?

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)


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